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Carrier DNA (鲑鱼精DNA)为短的线形单链DNA，可包裹质粒DNA，在酵母细胞摄取外源质粒DNA过程中发挥作用，促进质粒进入酵母细胞，另外还可保护质粒免于被DNA酶降解。在每次使用前务必进行两次热变性，保证Carrier DNA在转化实验体系中以单链形式存在。

• 初次使用Carrier DNA，请把装有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5min，然后立即放在冰上，用后放在-20℃储存备用。下次使用时请在冰上解冻Carrier DNA。
  
• PEG溶液在低温环境下会析出，请于常温环境下完全溶解后使用。
  
• 转化全程要无菌操作。

• 酵母感受态细胞的制备：
  
  • 活化菌种。-80℃保存的菌种在固体YPDA培养基(YPDA加20g Agar/L)上划线，在30℃培养2～4天。
    
  • 挑取酵母单菌落在固体YPDA培养基上划3～5mm的短线，在30℃培养2～4天。待酵母单菌落长至2mm长时，接种。
    
  • 首先把酵母细胞接种到3mL液体YPDA培养基中，30℃过夜培养。
    
  • 第二天转接到含有30mL液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养，待OD600到0.4～0.5范围内。收集细胞，1000g，离心5min，去上清。
    
  • 沉淀用30～50mL的无菌的去离子水悬浮。1000g，离心5min，去上清。
    
  • 沉淀用合适体积的100mM LiAc悬浮(30mL的酵母菌最多用不超过1mL的100mM LiAc悬浮，通常100μL的酵母细胞用于转化一个质粒，即一个反应)。
    
  • 把酵母细胞的悬浮液分装到1.5mL的离心管中，每管分装100μL，用于转化一个质粒即一个反应。1000g，离心5min，去上清。制备好的感受态细胞备用。
• 酵母转化：
  
  • 配制预混液，每转化一个质粒即一个反应需要360μL的预混液。
    

    成分	用量
    50% PEG	240μL
    1M LiAc	36μL
    Carrier DNA(10mg/mL)	5μL
    质粒(大约200ng/μL)	5μL(根据质粒的浓度加入相应的体积)
    总体积	360μL

  • 吸取360μL的预混液加入到感受态细胞中，用枪头反复吹吸沉淀，使离心管底的酵母细胞彻底地悬浮在含有PEG的预混液中。
    
  • 放置在30℃的水浴锅中孵育30min，每10min混匀一次。
    
  • 放置在42℃的水浴锅中热击30min，每10min混匀一次。
    
  • 12000rpm，离心1min，去掉上清液。
    
  • 沉淀中加入100μL的无菌的去离子水，悬浮沉淀。
    
  • 把酵母细胞涂到相应的酵母培养基平板上，30℃培养2～4天。